Отправлено: 26.06.09 01:18. Заголовок: Макро, микро и супермикро… или зачем металловеду электронный микроскоп.

Макро, микро и супермикро… или зачем металловеду электронный микроскоп.

Как металловеды используют металлографический микроскоп, вы уже знаете. Об этом было здесь - http://mycoweb.narod.ru/fungi/Informe/Photographing_of_mushroom_spores.html
Как приспособить электронный микроскоп для решения своих задач?
Прежде всего, нужно выполнение нескольких обязательных условий.
Первое – Вы должны сформулировать решаемые задачи.
Второе – нужен сам микроскоп.
Третье – время и желание владельцев микроскопа тратить это самое время на Вас.

 Отправлено: 26.06.09 01:19. Заголовок: Итак, вооружаемся об..

Итак, вооружаемся объектами для исследований, десятком банок пива и едем в гости в одну замечательную организацию, которую просили нигде не называть…

Начнём с того, что у нас была возможность выбора, на каком микроскопе семейства VEGA проводить исследования.

Выбрали VEGA II XMU, кроме того, химический анализ нам был не нужен.

Следующий необходимый шаг перед откупоркой банок с пивом…?
Правильно! Пиво нужно охладить, а биологические объекты, к коим относятся споры (не электропроводные, заметим) нужно металлизовать, чтобы избежать заряда объекта и последующих негативных явлений, таких как появление белых размазанных «хвостов» на изображении, или, что значительно хуже, сдувания лёгкого объекта электронным «ветром».

Итак, холодное пиво, металлизованные объекты и электронный микроскоп…

Небольшое отступление. Электронно-микроскопические изображения сопровождены фотографиями спор, выполненными на обычном металлографическом микроскопе, и, конечно же, фотографиями самого Его Величества Гриба. В том числе и стерео.

Начнём с банальных грибов – хорошо известный всем Подосиновик красный (Leccinum aurantiacum) с гладкими спорами.

Действительно, в случае гладкой поверхности спор электронная микроскопия не даёт существенных результатов. Сравните сами оптическую фотографию и ЭМ-изображение.


Следующий объект – Дисцина щитовидная (Discina_perlata).
Перекрёстная и прямая пары.

Гладкая (почти гладкая) поверхность споры, и электронная микроскопия даёт возможность увидеть мельчайшие детали строения поверхности.

Однако мы с Вами тут же замечаем существенный недостаток электронной микроскопии – она не даёт возможности заглянуть внутрь объекта и изучить его строение.


Псевдоплектания черноватая (Pseudoplectania nigrella).
Перекрёстная и прямая пары.


Всегда задавался вопросом, что за «глазки» видны на микрофотографии сухих спор Псевдоплектании? Они, кстати, исчезают при размачивании спор.

И вот он – ответ! Это «впуклости» или «впячивания» на сферической поверхности споры, что отчётливо передаёт ЭМ-изображение.


Ивишень или Огуречный гриб (Clitopilus prunulus).

«Семечки» спор, сухие и размоченные.

На ЭМ-изображении хорошо видны белые «хвосты», вызванные перезарядкой недостаточно металлизованных объектов.

 Отправлено: 26.06.09 01:20. Заголовок: Паутинник багряный (..

Паутинник багряный (Cortinarius purpurascens).

Здесь мы видим, что и оптическая и электронная микроскопия хорошо передают характер поверхности спор этого гриба.
Однако если на оптической фотографии видно только, что поверхность спор шероховатая, то на ЭМ-изображении отчётливо видны особенности строения поверхности.
Кроме того, мы видим и ещё один недостаток электронной микроскопии – она не умеет передавать цвет!


Энтолома прекрасная (Entoloma nitidum).
Перекрёстная и прямая пары.

На микрофотографии хорошо видна характерная угловатая форма энтоломовых спор.

Что же нам показывает электронный микроскоп? Неужели это просто скомканные маленькие бумажки?


Волоконница звёздчато-споровая (Inocybe asterospora).

Не зря этот гриб получил своё имя… Сколько лучей у звёздочек-спор?

На ЭМ-изображении детали видны намного лучше, и мы можем без труда подсчитать лучи. Сколько у Вас получилось в среднем на одну спору?


Млечник жгуче-млечный (Lactarius pyrogalus).

Для млечников (Lactarius), как и для сыроежек (Russula), одним из ключевых признаков их идентификации является количество, форма и взаимное расположение шипов и гребней на поверхности спор. Только, к сожалению, наблюдать эту красоту в оптический микроскоп без иммерсионной жидкости практически не возможно.

Другое дело – микроскоп электронный с его высокой разрешающей способностью и глубиной резкости…


Другой Млечник – Млечник дубовый (Lactarius quietus).

Другой вид млечника, и совершенно иное расположение шипов и гребней на поверхности спор.


Наконец - Волнушка белая (Lactarius pubescens).

Опять шиповатые споры и их форма – идентификационный признак.

Объект был недостаточно металлизован и часть спор просто унесло электронным "ветром". Видите три тёмных пятна? Там только что были споры…

 Отправлено: 26.06.09 01:21. Заголовок: Рогатик Инвала – (Ra..

Рогатик Инвала – (Ramaria invalii).

Вытянутые (и прохожие на семечки) шиповатые споры.

"Какие красивые бяки" – сказала моя коллега по работе.


Телефора кисточковидная – (Thelephora penicillata).

Когда я первый раз нашел этот гриб и не знал ещё, как его называют, был приятно удивлён тем, что форма спор до удивления напоминает форму самого гриба.
Гриб был старый, и споры у старого гриба получились неказистые.

Однако неказистость тут же исчезла, стоило только воспользоваться электронным микроскопом.
Планета Маленького принца – решили мы!


Опять Телефора кисточковидная, на этот раз посвежее. К слову сказать, найти телефору – непростая задача. Уж очень хорошо она маскируется.


Гриб в самом расцвете сил, и споры у него фотогеничные.

Опять планета Маленького принца. Зачем ему столько?


Траметес жёстковолосисстый – (Trametes hirsuta).

Фотографируя споры этого гриба, был убеждён, что часть спор (та, которая выглядит как округлые частицы) располагается вертикально, "втыкаясь" в поверхность стекла.

Электронная микроскопия показала, что споры при падении буквально расплющиваются и намертво прилипают к стеклу.


Энцелия шелушистая – (Encoelia furfuracea).

Аналогичная ситуация со спорами энцелии. Отличие состоит только в том, что к стеклу в основном приклеиваются комки (конгломераты) спор, покрытые довольно толстым слоем слизи.

"Краковские колбаски в желе". При металлизации такого конгломерата получается малоконтрастная картинка, потому что тонким слоем золота покрывается поверхность и спор и "желе", в котором они плавают.

Попадаются и одиночные споры.

 Отправлено: 26.06.09 01:22. Заголовок: Лензитес березовый –..

Лензитес березовый – (Lenzites betulina).

Попытка получить изображение спор на базидиях закончилась блестящим подтверждением тезиса о том, что ВСЁ в грибах состоит из гиф. А что споры?.. А споры все улетели-высыпались.


Пикнопорус киноварный – (Pycnoporus_cinnabarinus).

"Гифы грибов способны тесно переплетаться, образуя ложную ткань – плектенхиму".


Напоследок – несколько историй из мира грибов и примкнувших.
Дедалеопсис трёхцветный – (Dedaleopsis_tricolor).
Перекрёстная и прямая пары.

Каким ветром в гименофор гриба занесло чешуйки с крыла бабочки? Наверное, мы это никогда не узнаем. Чешуек было много.

Но, к сожалению, почти все они были унесены "ветром" (электронным). Осталась только одна неказистая.


Неопознанная жёлтая сыроежка – (Russula sp).

Грибной клещ Пигмефорус (Pygmephorous). Зачем он здесь? Кстати, споры сыроежки ему, по-моему, как раз "по зубам".


Принимаются любые критические и конструктивные высказывания.

 Отправлено: 26.06.09 06:59. Заголовок: SAE ААААААААААААффи..

SAE
ААААААААААААффигеть!!!!!!!
ТАКОГО наверное еще никто не делал!
Слов нет! Спасибо ОГРОМНЕЙШЕЕ! Такой позитив с утра!

 Отправлено: 26.06.09 07:08. Заголовок: :sm15: :sm73: А п..

А почему не в виде статьи на сайт?

 Отправлено: 26.06.09 07:18. Заголовок: SAE Да, это должен у..

SAE Да, это должен увидеть мир! Обязательно статью на сайт!

 Отправлено: 26.06.09 07:39. Заголовок: SAE Сказать впечатля..

SAE
Сказать впечатляет - ничего не сказать. Ошеломляет и потрясает! Микологам, да и не только, при взгляде на подобные сканы спор гарантировано обильное слюноотделение.

 Отправлено: 26.06.09 08:38. Заголовок: SAE Есть к чему стр..

SAE
Есть к чему стремиться Не удивлюсь, если скоро здесь увижу грибные ДНК штрих-коды.

 Отправлено: 26.06.09 08:51. Заголовок: SAE Тут даже смайли..

SAE
Тут даже смайлики не oчень пoмoгают. Слoв нет. Огрoмнoе Вам спасибo, Андрей! Эту рабoту (и вoзмoжные ее расширения?) надo публикoвать и в виде статьи, абсoлютнo сoгласен с coloboc !
А передo мнoй - oчередная, приятная задача: Перевoдить эту штуку и oтдать друзям на чтение...

 Отправлено: 26.06.09 10:05. Заголовок: SAE Да, впечатляет. ..

SAE
Да, впечатляет. Вот что интересно: "шипы" на спорах. Это по типу репейниковых "ёжиков", чтоб лучше цепляться?
Мало того, что споры почти невесомы, да ещё есть возможность прицепиться и... перекочевать на другой континент!

 Отправлено: 26.06.09 10:07. Заголовок: Андрей, ошеломляюще ..

Андрей, ошеломляюще замечательная работа!
Действительно, не хватает слов...
Однозначно, такой материал требует статейного статуса.

 Отправлено: 26.06.09 12:05. Заголовок: SAE, фантастика! :s..

SAE,
фантастика!

 Отправлено: 26.06.09 12:11. Заголовок: SAE Вот это прорыв..

SAE

Вот это прорыв!!!

 Отправлено: 26.06.09 12:31. Заголовок: SAE Андрей, если на..

SAE
Андрей, если надумаете публиковать на сайте - самый зеленый свет такому шикарному материалу я гарантирую.
Даже от рыбалки на пару-тройку дней отвлекусь ради такого шедевра.

 Отправлено: 26.06.09 12:51. Заголовок: Андрей! А-бал-деть!..

Андрей!
А-бал-деть!
Обязательно "отчет"на сайте! (Что значит, "если надумаете"???), подработать -и на сайт!
Да, с таким микроскопом можно работать...

 Отправлено: 26.06.09 13:01. Заголовок: SAE 1. Жаль, что я ..

SAE
1. Жаль, что я не металловед
2. Жаль, что не могу выполнить 1 и 3 обязательные условия в связи с отсутствием 2
3. Прими восхищение твоей неиссякаемой энергией, жаль, что у меня нет сотой доли таковой.
Мне еще вот что кажется. При опубликовании на сайте(нет сомнений, спасибо Вячеславу!) нужно в каждую твою статью отсюда дать ссылки на соответствующие описания на сайте, а что еще лучше - в каждом описании иметь эти фото в полном объеме!
Андрей, ты поднимаешь сайт, мне кажется, на более высокий уровень. Спасибо!

 Отправлено: 26.06.09 13:45. Заголовок: SAE, фантастический ..

SAE, фантастический материал! Огромное спасибо Вам за Вашу работу! Надеюсь, что Вы будете продолжать работать в этом направлении с обязательным размещением материалов на сайте.

 Отправлено: 26.06.09 18:33. Заголовок: Потрясающе, просто с..

Потрясающе, просто слов нет! Целый новый мир! Огромное спасибо!

 Отправлено: 26.06.09 18:34. Заголовок: SAE Браво!! До чего..

SAE
Браво!! До чего техника дошла... Я с нашим Цейсом тихо уползаю под лавку

SAE пишет:

цитата:

Всегда задавался вопросом, что за «глазки» видны на микрофотографии сухих спор Псевдоплектании

На самом деле "глазки" - это газовые пузырьки, которые образуются при обезвоживании цитоплазмы спор (так наз. пузырьки Де Бари). При попадании спор в воду они естественным образом исчезают. А на электронных снимках видны спавшиеся (как сдувшийся мяч) из-за вакуума в котором они находятся споры.

 Отправлено: 26.06.09 20:38. Заголовок: Друзья, спасибо всем..

Друзья, спасибо всем высказавшим своё мнение по поводу статьи.
Grey пишет:

цитата:

Такой позитив с утра!

Рад, что доставил всем такое удовольствие. Самому приятно. Спасибо.

Теперь небольшая дискуссия.
Grey пишет:

цитата:

Обязательно статью на сайт!

coloboc пишет:

цитата:

А почему не в виде статьи на сайт?

Статья обязательно появится. А на форуме проще и быстрее её "обкатать".
jmette пишет:

цитата:

А передo мнoй - oчередная, приятная задача: Перевoдить эту штуку и oтдать друзям на чтение...

Спасибо за пропагандирование идей электронной микроскопии среди немецких друзей.
eugene пишет:

цитата:

Я с нашим Цейсом тихо уползаю под лавку

Электронная микроскопия лишь дополняет оптическую, а никоим образом её не отменяет. Цвет и внутреннее строение ЭМ недоступны. Пока.
Stalker пишет:

цитата:

Надеюсь, что Вы будете продолжать работать в этом направлении

Безусловно! Мне доставляет удовольствие с друзьями работать на великолепном оборудовании и пить пиво. Два дня работали, всё было - и юстировка микроскопа, и обсуждение рабочих вопросов (по роду деятельности мы металловеды) и грибных моментов (кто ж не любит собирать грибы?), и, конечно же, пиво.
ariona пишет:

цитата:

нужно в каждую твою статью отсюда дать ссылки на соответствующие описания на сайте, а что еще лучше - в каждом описании иметь эти фото в полном объеме!

В каждом описании ЭМ изображения (не фотографии - именно изображения, которые рисуют электроны) появятся обязательно, стоит только отправить материалы Вячеславу. А идею насчёт ссылок поддерживаю.
Kessler пишет:

цитата:

Вот что интересно: "шипы" на спорах. Это по типу репейниковых "ёжиков", чтоб лучше цепляться?

Наверняка так. Эту мысль нужно будет обдумать. Интересно.
eugene пишет:

цитата:

На самом деле "глазки" - это газовые пузырьки, которые образуются при обезвоживании цитоплазмы спор (так наз. пузырьки Де Бари). При попадании спор в воду они естественным образом исчезают. А на электронных снимках видны спавшиеся (как сдувшийся мяч) из-за вакуума в котором они находятся споры.

На самом деле газовые пузыри в вакууме должны разорвать спору на части, хотя я думаю, газ просто диффундировал через оболочку споры.
Встречались два типа спор - с "глазками" - пузырьками де Бари, и со сдувшимися стенками.
Короче говоря - ОМ и ЭМ показывают нам два различных объекта.
Эту часть материала следует дополнить ещё оптической фотографией (она есть) и переписать, что и будет сделано немного позже.
vstepanov пишет:

цитата:

Андрей, если надумаете публиковать на сайте - самый зеленый свет такому шикарному материалу я гарантирую. Даже от рыбалки на пару-тройку дней отвлекусь ради такого шедевра.

Уже давно надумал. Материал почти готов к размещению. Нужно чуть подправить некоторые шероховатости, определить неопределённую до сих пор сыроежку, уточнить видовую принадлежность млечника серого и, самое главное, научиться предоставлять материал в виде HTML. Чтобы в полевой сезон не отвлекать сильно Админа от работ в поле.

 Отправлено: 26.06.09 22:01. Заголовок: Андрей, сказать что ..

Андрей, сказать что я в шоке, ничего не сказать. Такое ощущение, что увидел живых инопланетян.
Спасибо огромною и ждём статью на сайте.

 Отправлено: 26.06.09 22:08. Заголовок: Velibor пишет: сказ..

Velibor пишет:

цитата:

сказать что я в шоке, ничего не сказать

SAE пишет:

цитата:

тонким слоем золота покрывается поверхность спор

Маски фараонов

SAE, а какова предельная разрешающая способность такого микроскопа?

 Отправлено: 26.06.09 23:22. Заголовок: kut пишет: Маски фа..

kut пишет:

цитата:

Маски фараонов SAE, а какова предельная разрешающая способность такого микроскопа?

Кстати, золото напыляется настолько тонким слоем, что после этого споры можно размачивать в воде или щелочном растворе, и фотографировать на оптике.
http://www.tescan-usa.com/VEGA.htm
3 нанометра.

 Отправлено: 26.06.09 23:58. Заголовок: SAE, спасибо! 0.003 ..

SAE, спасибо!
0.003 мкм ... Вот и у меня слова закончились!

 Отправлено: 27.06.09 02:03. Заголовок: SAE Спасибо большое..

SAE
Спасибо большое! Получила огромное удовольствие. Это, действительно, прорыв!
Верю, что последовательности ДНК на сайте не за горами. Не зря говорят - Не имей сто рублей, а имей сто друзей.

Споры Entoloma nitidum конструктивно оказались более слабыми, чем многие другие из Ваших образцов (Ведь как замечательно видны шипы, ребра и гребни у сыроежки, волоконницы, млечников!) А тут скомканные бумажки. Просто оболочка спор Entoloma nitidum более тонкая и углы менее выражены, чем у других видов рода (подумывают перевести ее в Rhodocybe. Поэтому споры легко спадаются, что и видно на Вашем замечательным снимке.

 Отправлено: 27.06.09 14:00. Заголовок: SAE пишет: На самом..

SAE пишет:

цитата:

На самом деле газовые пузыри в вакууме должны разорвать спору на части, хотя я думаю, газ просто диффундировал через оболочку споры.

В микромире часто всё происходит не так, как в нашем привычном, действительно, пузырьки вполне могли не разорвать спору а тихо улетучиться диффузией. Вакуум-то в микроскопе наверное не мгновенно набирается.

 Отправлено: 27.06.09 15:13. Заголовок: Grey пишет: ТАКОГО ..

Grey пишет:

цитата:

ТАКОГО наверное еще никто не делал!

Есть, конечно, в литературе ЭМ-изображения спор, но из микологов-любителей такого наверняка ещё никто не делал

 Отправлено: 27.06.09 21:50. Заголовок: ОГО!!! Это же мечта..

ОГО!!! Это же мечта!

SAE - а может быть Вы волшебник? И можете исполнить мечту?

Может быть Вы разрешите уже занять очередь для получения чудо фотографий спор Clitocybe, Lepista и прочих похожих на них? У многих видов этих родов такие крошечные бесцветные (или почти) споры с плавными переходами от гладкой до орнаментированной поверхности, что разобраться в них с моим Биоламом можно скорей по интуиции, чем по реальной картинке. А тут такое!!!


SAE пишет:

цитата:

Нужно чуть подправить некоторые шероховатости, определить неопределённую до сих пор сыроежку, уточнить видовую принадлежность млечника серого

Вот теперь, с такими фотографиями гораздо увереннее можно говорить об определении сыроежек, млечников и других видов с орнаментированными спорами.
Ваш млечник серый скорее всего Lactarius pyrogalus, если там, где собирали образец рос орешник. Этот вид довольно близок к серушке (в одной секции) и внешне тоже довольно похож - относительно редкие желтоватые пластинки, наличие серого тона в шляпке, но обычно чуть более клейкий, чем flexuosus, в окраске больше желтоватого, и растет с орешником. И конечно, споры! На вашем снимке видно, что у спор довольно высокие, но редкие и почти изолированные, не соединенные сетью хребтики. У L.flexuosus - хребтики соединены тонкими линиями, формирующими неполную сеть. Кроме того споры L.pyrogalus чуть поменьше и соответствуют нужным размерам (я измерила, пользуясь вашим масштабом на эл.снимке) - 5-7,5х4,5-6 (против 6-8,5х5-7 у flexuosus)

По поводу сыроежки. Не считаю себя знатоком большой и сложной группы сыроежек, но не могу отделаться от ощущения, что это родственник валуя. За: невнятный желтовато-коричневатый неровный цвет, клейкость (сверху виден прилипший мусор), вздуто-желобчатый край, появление грязновато-бурых пятен на пластинках и ножке. Споры у видов этой группы такие
.
Похоже?
Неизвестны только запах и вкус, которые помогли бы определить вид (их несколько похожих в этой секции)

 Отправлено: 27.06.09 23:28. Заголовок: Foxy Все приметы со..

Foxy
Все приметы совпадают, и орешника там навалом.
Записываю в Lactarius pyrogalus - Млечник жгуче-млечный.

Сыроежка действительно смахивает на валуй. И я её вначале назвал С.валуйная, но это другой гриб.
Запах и вкус вряд ли я вспомню, скорее ничего особенного.
А какие варианты?

 Отправлено: 28.06.09 00:18. Заголовок: SAE C похожими спор..

SAE
C похожими спорами в валуйной секции есть R.pectinatoides, R.pectinata, R.foetens, R.subfoetens. Сам валуй Вы скорее всего отличили бы в поле - он сильно пахнет и обычно более сопливый (хотя если тепло и сухо даже у людей сопли пропадают :)). Но по размеру спор на Ваших снимках валуй подходит лучше всех (7.5-10 x 7-8.5), если масштаб абсолютно точен...
А дальше идти проблематично, поскольку не известны запах и вкус и, увы, отрезано основание ножки. У R.pectinatoides и R.pectinata основание ножки бывает красно-бурое. И еще отмечают иногда такого же цвета пятнышки на других частях пл.тела (при старении). У первой вкус мягкий ил чуть островатый, но неприятно маслянистый и как бы вяжущий, запах не сильный (если специально не нюхать, можно не обратить внимание), но тоже неприятный (трудно описать, что-то с оттенком лежалой жирной рыбы). У второй запах похожий по неприятности, а вкус очень острый.

И еще есть R.subfoetens. Привожу описание
Sp 7-9.5 x 6-7.5 µm, ellipsoid, verrucose with some crests, warts up to 0.8 µm (fig. 115E);
cap 50-100(-140) mm. Cap convex, soon becoming applanate, at margin tuberculate-sulcate,
sticky, pale yellow, yellow to brown or red brown; gills whitish to dirty cream, becom-
ing brown spotted when old; stem 50-80 x 15-25 mm, whitish, becoming brown spotted, ±
hollow; flesh whitish, but distinctly yellowing, especially after treatment with KOH; taste
moderately acrid in the gills; smell weak, slightly fruity; sp deposit cream (IIbc). Dcy in
pileipellis not reacting with SV. In deciduous forests with Betula, Populus, Fagus and Quercus
and in herb-rich Picea forests; summer to autumn; rare in temp.-bore., but possibly confused
with related species.
R. subfoetens W.G. Sm
R.pectinatoides у меня в области довольно обычна, два других определять не доводилось, хотя легко могла пропустить из-за похожести.

 Отправлено: 29.06.09 13:20. Заголовок: SAE Потрясающе! Сл..

SAE

Потрясающе! Слов нет.

 Отправлено: 12.09.09 00:18. Заголовок: Виноват, что давно н..

Виноват, что давно не просматривал форум и пропустил этот топик. Но сами фотографии видел в новых поступлениях, много восхищался и показывал своим близким. Надеялся, что скоро появится статья на сайте ГКО.

Присоединяюсь к восторженным отзывам участников. Браво!

 Отправлено: 16.09.09 14:22. Заголовок: SAE Круто :sm36: и..

SAE
Круто и очень интересно!
А споры миксомицетов будут?

 Отправлено: 16.09.09 17:30. Заголовок: Stvov Восхищаюсь Ваш..

Stvov Восхищаюсь Вашими работами! Завидую белой завистью. Присоединяюсь к просьбе посмотреть споры миксов на электронном микроскопе. На пиво скинемся :)